Title: GERMINAÇÃO E GETOXICIDADE EM SEMENTES DE ALFACE TRATADAS COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE EXTRATO DE Rosmarinus officinalis L
Author: Letícia

GERMINAÇÃO E GETOXICIDADE EM SEMENTES DE ALFACE TRATADAS COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE EXTRATO DE Rosmarinus officinalis L.
Cattelan, L. V.^1,3*; Stein, V.^1,3; Büttow, M. V.^1,3; Vilanova, L. B.^1,3; Heiden, G.^1,3; Iganci, J.^1,3; Bobrowski, V.L.^2,3; Rocha, B.H.G.^2,3
^1Acadêmicos do Curso de Ciências Biológicas/UFPel, 
^2Professora Adjunta DZG/IB/UFPel
^3Laboratório de Biologia Celular – DZG/IB/UFPel
Campus Universitário s/n, C.P. 354 – CEP 96010-900 – Pelotas/RS 
*lvcatte@yahoo.com.br

1. INTRODUÇÃO

As plantas medicinais são amplamente utilizadas na medicina popular, apresentando propriedades terapêuticas. Entretanto, estas também podem causar efeitos tóxicos para os organismos vivos devido às substâncias produzidas pelo metabolismo secundário que é específico de determinadas espécies.
O alecrim (Rosmarinus officinalis L.), pertencente à família Lamiaceae, popularmente utilizado como condimento apresenta efeito medicinal no tratamento de dores de cabeça, problemas respiratórios e como estimulante digestivo. Possui óleos essenciais que contém pireno, taninos, saponinas, flavonóides e ácido rosmarínico, que podem causar alterações tanto positivas como prejudiciais sobre outras plantas, contendo também alcalóides que são altamente tóxicos e alucinógenos em doses elevadas [3].
Detectar e entender a ação das substâncias denominadas genotóxicas é fundamental dentro da específica área chamada de Genética Toxicológica, mais precisamente sua ação sobre os ácidos nucléicos. Tais efeitos podem ser tanto em células somáticas como germinativas, podendo causar danos no próprio indivíduo ou aos seus descendentes [5].
	A alelopatia é considerada como um efeito direto ou indireto, danoso ou benéfico, que uma planta exerce sobre outra, pela produção de compostos químicos liberados no ambiente. Ainda hoje, pouco se sabe sobre os efeitos alelopáticos de plantas medicinais no estabelecimento de outras espécies vegetais, principalmente sobre a germinação [1]. A utilização de bioensaios com plantas constitui uma ferramenta disponível e valiosa na identificação e monitoramento de substâncias potencialmente tóxicas, sendo realizada através de espécies como cebola (Allium cepa L.) e alface (Lactuca sativa L.).
Alterações químicas no material genético das células de organismos vivos podem ser induzidas por produtos sintéticos ou naturais. Tais modificações podem, com isso, prejudicar processos vitais das células, acarretando morte celular ou alterações cromossômicas [4]. Uma forma de monitorar os produtos fitocomplexos provenientes do metabolismo secundário de algumas plantas é avaliar seu potencial genotóxico e citotóxico, através do índice mitótico (IM) e da presença de aberrações cromossômicas (AC), quebras cromossômicas, cromossomos em anel e demais erros na divisão celular.
Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito alelopático, citotóxico e genotóxico do extrato aquoso de alecrim (Rosmarinus officinalis L.) sobre sementes de alface (Lactuca sativa L.). 

2. MATERIAL E MÉTODOS

Este trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Biologia Celular do Departamento de Zoologia e Genética da UFPel. 
Em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições de 100 sementes, foi utilizado extrato aquoso de alecrim em três concentrações (15mg/mL, 30mg/mL e 60mg/mL), e água destilada (AD) como controle negativo, sendo a concentração de 30mg/mL a recomendada para uso medicinal. As sementes de alface foram semeadas em gerbox sobre papel germiteste umedecido com extrato de alecrim e AD no controle, na proporção de 1:2,5 (peso:volume) sendo, após, acondicionadas em B.O.D. sob temperatura de 20ºC, fotoperíodo de 8h luz/16h escuro, e avaliadas aos quatro e sete dias segundo as Regras de Análise de Sementes.
Para avaliação do IM, pontas de raízes foram coletadas, fixadas em Carnoy (3:1), e mantidas em freezer até a confecção de lâminas, posteriormente hidrolizadas em HCl 5N e coradas com orceína acética 2%, sendo realizada contagem de 2000 células/tratamento em microscópio óptico numa magnitude de 40x. 
A análise estatística para avaliação do IM foi realizada pelo teste de Duncan através do Programa SANEST [6], e a avaliação da germinação pela análise de regressão.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Foi observado efeito alelopático progressivo do extrato aquoso de alecrim sobre o percentual germinativo das sementes de alface conforme o aumento da sua concentração, ou seja, 76% de germinação na concentração de 15mg/mL, 59% na de 30mg/mL, 18% na de 60mg/mL e 94% no controle (P<0,01). A análise de regressão demonstrou que a percentagem de germinação apresentou um comportamento retilíneo, com o coeficiente de determinação de 0,99 (Figura 1). 
	Gadelha et al. (2003) também observaram efeito alelopático do óleo de alecrim pimenta na percentagem de germinação de sementes de alface com uma concentração igual ou superior a 0,1%, apresentando um comportamento quadrático e um coeficiente de 0,73 através da análise de regressão. Iganci et al. (2003) analisaram a influência do extrato aquoso de boldo, guaco e macela sobre o poder germinativo de sementes de cebola com valores respectivos de 50,5%, 29,5% e 42,5%, sendo 58% a germinação do controle [2].
Através do teste de Duncan, não foi verificado efeito das diferentes concentrações do extrato de alecrim sobre o IM, quando comparado ao controle (P<0,05). Porém, foi observado um aumento progressivo da presença de aberrações cromossômicas como cromossomos em anel, além de metáfase e anáfase desorganizada conforme aumentava a concentração do extrato em relação à AD (P<0,01) (Tabela 1).

           Figura 1. Efeito do extrato aquoso de alecrim sobre a germinação de    sementes de alface.

R^2= 0,997

Tabela 1. Percentual de divisão celular e número de aberrações cromossômicas            observadas em células meristemáticas de alface submetidas à diferentes concentrações de extrato aquoso de alecrim.

TRATAMENTOS | ÍNDICE MITÓTICO | Nº DE ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS
CONTROLE | 30,43 a | 0,25 a
15 mg/mL | 23,43 a | 3,25 a
30 mg/mL | 32,07 a | 5,75 ab
60 mg/mL | 21,01 a | 7,25 b
Letras distintas nas colunas indicam diferença estatística significativa pelo teste de Duncan ao nível de 5% para índice mitótico e 1% para aberrações cromossômicas.

4. CONCLUSÕES

O extrato aquoso de alecrim apresenta efeito alelopático de inibição da germinação em sementes de alface. Entretanto, a concentração recomendada popularmente para uso medicinal não demonstra efeito sobre o IM. Porém, o extrato aquoso de alecrim induz aberrações cromossômicas, principalmente na anáfase, em células meristemáticas de alface.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] GADELHA, J.C.; BORGES, N.S.S; NASCIMENTO, I.B. OLIVEIRA, M.A.S.; INNECCO, R.; MEDEIROS FILHO, S. Efeito alelopático de alecrim pimenta na germinação e vigor de alface. XIII Congresso Brasileiro de Sementes. Informativo Abrates. Gramado/RS. v. 13, n. 3, p. 425, 2003.
[2]   IGANCI, J. R. V.; HEIDEN, G.; STEIN, V.; BÜTTOW, M. V.; BOBROWSKI, V. L.; Efeito alelopático de três diferentes extratos sobre a germinação de Allium cepa (Liliaceae). XIII Congresso Brasileiro de Sementes. Informativo Abrates. Gramado/RS. v. 13, n. 3, p. 423, 2003.
[3]  SARTÓRIO, M.L.; TRINDADE, C.; RESENDE, P.; MACHADO, J.R. Cultivo orgânico de plantas medicinais.Viçosa, MG:Aprenda fácil, 2000. 260p.
[4] SILVA, J. da; ERDTMANN, B.; HENRIQUES, J.A.P. Genética toxicológica. Porto Alegre, RS: Alcance, 2003. 424p.
[5]  VOGEL, EW & SZAKMARY, A (1989). Basic Principles and Evaluation of Results of Assays Measuring Genotoxic Damage in Somatic Cells of Drosophila. 5th ICEMS Clevland (in press).
[6] ZONTA, E.P.; MACHADO,A.A. SANEST – Sistema de análise estatística para microcomputadores. Pelotas, 1984.