Title: RESPOSTA AOS REGULADORES DE CRESCIMENTO ANA E 2,4-D NA CALOGÊNESE DE DIEFFENBACHIA SP
Author: Marcos
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CALOGÊNESE EM Dieffenbachia sp.:
I. RESPOSTA AOS REGULADORES DE CRESCIMENTO ANA E 2,4-D

Ribeiro, M. F.*; Donini, L. P.; Ferreira-Moura, I.; Guisso, A. P.;
Pereira, J. M.; Viégas, J.

Laboratório de Biologia Celular, Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel
 Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 – Pelotas, RS 
*mirianpelotas@yahoo.com.br

1.	INTRODUÇÃO

A Família Araceae apresenta cerca de 108 gêneros e aproximadamente 3.750 espécies, monocotiledôneas herbáceas e trepadeiras, plantas predominantemente tropicais, mesmo ocorrendo, naturalmente, em todos os continentes (exceto na Antártida). Plantas dos trópicos, as aráceas não se dão muito bem com o frio. A temperatura ideal para elas deve estar entre 16ºC e 30ºC, com exceção do copo-de-leite, que suporta temperaturas inferiores a 0ºC. Suas características diferem muito quanto ao seu hábito de vida (em sua maioria são plantas terrestres, mas há várias espécies de epífitas e um gênero aquático), morfologia foliar (folhas desde simples e inteiras a compostas e altamente divididas, basais ou produzidas por um caule aéreo) e características da inflorescência (espádice com flores bissexuais ou unissexuais, rodeada por uma única espata em um pedúnculo longo ou muito curto). Existem aráceas altamente tóxicas, como as chamadas de comigo-ninguém-pode (Dieffenbachia sp) e outras que produzem partes comestíveis, como, por exemplo, as raízes do inhame (Alocasia esculenta) e da taioba (Xanthosoma violaceum) ou os frutos da costela-de-adão (Monstera deliciosa), conhecidos como banana-de-macaco ou banana do brejo. [6,7].
A planta ornamental Dieffenbachia sp., popularmente conhecida como comigo-ninguém-pode, é realmente uma planta tóxica, nativa da Colômbia e da Costa Rica. Possui porte regular, com cerca de 20-50 cm de altura, e caule tortuoso. Folhas oblongo-elípticas ou oblongo-lanceoladas, coriáceas, verdes, com máculas brancacentas irregulares. Sua belíssima folhagem cresce bem em locais com baixa luminosidade. As flores masculinas ocupam a porção superior da inflorescência. Os frutos são bagas vermelho-alaranjadas. Todas as partes da planta são tóxicas – caule, folhas e látex. A ingesta de porções desta planta libera toxinas e ráfides de oxalato de cálcio, presentes em seus tecidos, que causam sensação de queimadura, aumento de salivação, inchaço da língua e lábios, podendo, inclusive, provocar edema na garganta, levando à asfixia e, em casos extremos, até à morte, [1].
A cultura de tecidos é uma importante técnica para propagação de plantas e vem sendo utilizada com sucesso em várias espécies. A grande vantagem desta técnica é a obtenção de um grande número de plantas, de alta qualidade, num período de tempo bastante reduzido [4]. Essas técnicas, mesmo sendo bem difundidas em vários países, principalmente no hemisfério norte, tiveram sua implantação no Brasil, na área de floricultura e plantas ornamentais, somente no final dos anos 70. Estas técnicas são muito importantes, tanto na propagação de plantas sadias, como na propagação clonal das espécies que têm alto valor comercial para o país [2].
A propagação por meio da cultura de tecidos pode ser feita por via direta ou indireta (via micropropagação ou via formação de calos), podendo esta última ser considerada como método potencial de propagação, caso as variações genéticas não atinjam valores percentuais elevados. A organogênese indireta ocorre quando o processo de regeneração de gemas é precedido pela formação de calo, que é uma massa de células de proliferação contínua e mais ou menos desordenada. A partir de células não-organizadas do calo, surgem gemas adventícias que crescem e se desenvolvem em novas partes aéreas [5].
Segundo Conceição et al. [3], várias espécies podem ser induzidas a formar calos em cultura, os quais podem ser induzidos a diferenciar plantas inteiras, pela inclusão de reguladores de crescimento nos meios de cultura e incubação em ambiente adequado.
O presente trabalho objetivou induzir calos em lâminas foliares de Dieffenbachia sp, utilizando meios de cultura com diferentes concentrações de ANA e 2,4D.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

A presente pesquisa foi desenvolvida no Laboratório de Biologia Celular, do Departamento de Zoologia e Genética do Instituto de Biologia, UFPel.
Lâminas foliares de Dieffenbachia sp. foram lavadas em água corrente e água destilada (3x), antes de serem levadas para a capela de fluxo laminar para a instalação do experimento. A seguir, ficaram imersas em solução de álcool 70%, por 30 segundos, e em solução de hipoclorito de sódio comercial (1,5% de cloro ativo), adicionada de 2 gotas de Tween 20, por 30 minutos. As lâminas foliares, assim desinfestadas, foram cortadas, com o auxílio de pinça e bisturi, em explantes, com área aproximada de 1cm^2, que foram inoculados em frascos com 30 mL de meio de cultivo. Os meios utilizados foram os seguintes:

M1 = MS + 0,5 mg.L^-1 ANA
M2 = MS + 1,0 mg.L^-1 ANA
M3 = MS + 1,5 mg.L^-1 ANA
M4 = MS + 0,5 mg.L^-1 2,4D
M5 = MS + 1,0 mg.L^-1 2,4D
 M6 = MS + 1,5 mg.L^-1 2,4D.

Os frascos foram incubados, por 49 dias, em câmara de crescimento com temperatura controlada (25ºC ± 2ºC), no escuro. Nesse período, foram realizadas avaliações semanais e atribuídas as seguintes notas, quanto ao aspecto do explante: nota 0 = explante oxidado e/ou contaminado, nota 1 = explante sem modificação, nota 2 = explante com bordas onduladas, nota 3 = explante com formação de pequenos calos e nota 4 = explante com calos totalmente formados.
A unidade experimental foi composta de 5 explantes por frasco. O experimento fatorial foi delineado inteiramente ao acaso, com 5 repetições por tratamento. Os resultados obtidos foram analisados com o auxílio do pacote estatístico SANEST [10], sendo aplicado o teste de Duncan, ao nível de 5% de probabilidade.

3.	RESULTADOS E DISCUSSÃO

Pela análise da variação, verificaram-se diferenças altamente significativas (α=0,01) entre as diferentes concentrações de 2,4-D no meio de cultivo. O desdobramento das médias pelo Teste de Duncan, mostrou que, somente aos 49 dias de incubação in vitro, o meio contendo 1,5 mg.L^-1 de 2,4-D diferiu estatisticamente dos demais (Tabela 1). A diminuição das médias de calogênese, verificada a partir do 35º dia de incubação, deveu-se à ocorrência de contaminação e/ou desoxidação.

Tabela 1: Calogênese em lâmina foliar de Dieffenbachia sp., em 49 dias de incubação in vitro, em meio MS acrescido de diferentes concentrações de 2,4D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético)

2,4-D
(mg.L^-1)

Dias de incubação in vitro

| 14 | 21 | 28 | 35 | 42 | 49
0,5 | 2,0000 a | 1,9198 a | 1,9198 a | 1,9198 a | 1,9996 a | 1,9996 a
1,0 | 1,9599 a | 2,0000 a | 2,0000 a | 1,9198 a | 1,9599 a | 1,9599 a
1,5 | 1,9198 a | 2,0000 a | 2,0000 a | 2,0000 a | 1,6366 a | 1,5568  b
Médias seguidas por letras distintas nas colunas, diferem entre si, ao nível de 5%

A análise da variação não mostrou diferenças significativas entre as médias de calogênese das diferentes concentrações de ANA, apresentadas na Tabela 2.

Tabela 2: Calogênese em lâmina foliar de Dieffenbachia sp., em 49 dias de incubação in vitro, em meio MS acrescido de diferentes concentrações de ANA (ácido naftalenoacético)

ANA
(mg.L^-1)

Dias de incubação in vitro

| 14 | 21 | 28 | 35 | 42 | 49
0,5 | 1,8394 | 1,8394 | 1,6792 | 1,3566 | 1,3566 | 1,2357
1,0 | 1,3968 | 1,3968 | 1,3968 | 1,3968 | 1,4355 | 1,4355
1,5 | 1,3988 | 1,3988 | 1,3988 | 1,3988 | 1,3184 | 1,3184
As médias, nas colunas, não diferem entre si, ao nível de 5%

	Em trabalho realizado com calogênese em Caladium sagitifolium, Mujib et al. [7] avaliaram a influência dos reguladores de crescimento ANA (0,5 a 1,0 mg.L^-1) e BAP (0,5 a 1,0 mg.L^-1), assim como 2,4-D (0,05 a 2,0 mg.L^-1). Também, ao trabalhar com calogênese de Caladium x hortulanum nos meios MS e N6, com diferentes doses de ANA, BAP e 2,4D, Rocha [9] obteve a formação de calos somente no meio MS adicionado de 1,0 mg.L^-1 de ANA + 1,0 mg.L^-1 de BAP, sendo que nenhum calo foi formado no meio suplementado com 2,4-D. Estes autores verificaram que a adição tanto de ANA como de BAP no meio de cultivo foi mais satisfatória do que a adição de 2,4-D, pois obtiveram calos mais vigorosos. Estes resultados discordam dos obtidos no presente trabalho, visto que a adição de 2,4-D no meio de cultivo propiciou o início do processo de calogênese com mais rapidez.

4.	CONCLUSÃO

Baseado nos resultados obtidos verifica-se que a utilização de 2,4-D no meio de cultivo foi propícia a que, em média, os explantes estejam no estágio inicial da calogênese após sete semanas de incubação. É necessária, no entanto, a continuidade deste estudo, tanto com a utilização de outras concentrações de ANA e 2,4-D e combinações dos mesmos, como com a avaliação de outros reguladores de crescimento, não utilizados no presente trabalho.

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1]   BOWN, D. Aroids: plants of the Arum family. Timber Press, Portland. 2000. 392 p.
[2] CASTRO, C. E. F. Técnicas e potencialidades da micropropagação em floricultura e plantas ornamentais. In: IV CONGRESSO BRASILEIRO DE FLORICULTURA E PLANTAS ORNAMENTAIS, 1984, Brasília, Anais. Rio de Janeiro: EMBRAPA-DDT, 1984.
[3] CONCEIÇÃO, H. E. O. da; PINTO, J. E. B.; OLIVEIRA, C. de S.; BARBOSA, A. S. A. B.; VIEIRA, I. M.S. Indução, formação e manutenção de calos em explante radical de timbó-vermelho.In: XIV Congresso Brasileiro de Floricultura e plantas Ornamentais e I Congresso Brasileiro de Cultura de Tecidos, 2003, Lavras, MG, Anais. Lavras: UFLA/FAEPE, 2003, p.237
[4] DONINI, L. P. Preparo de Lâminas Foliares de Aráceas Ornamentais: Desinfestação e Tratamento Antioxidante. Pelotas. RS. 54 f. Monografia de conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas – Meio Ambiente, Instituto de Biologia, Universidade Federal de Pelotas), 2004.
[5] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M. A. Micropropagação. In: Torres, A. C.; Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas. Brasília: Embrapa SPI/ Embrapa – CNPH. 1998. 864p.  
[6] IAS, International Aroid Society (2002) The genera of Araceae. Captured online 15/08/2004. Available at http://www.aroid.org/genera/index.html#a
[7] GRAYUM, M.H. Evolution and Phylogeny Of The Araceae. In: Annals Of The Missouri Botanical Garden, p. 629-697, 1990.
[8] MUJIB, A; MAITY, I.; JANA, B.K. Rapid in vitro multiplication of Caladium sagitifolium. Advances in Plant Sciences. v. 9, n 1, p. 47-50, 1996.
[9] ROCHA, M.T.R. Propagação in vitro dos gêneros Anthurium e Caladium. Pelotas, 1999. 82f. Dissertação (Mestrado em Agronomia – Fitomelhoramento) – Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, UFPel, 1999.
[10] ZONTA, E.P., MACHADO, A. A. SANEST - Sistema de Análise Estatística para Microcomputadores. Registrado na Secretaria Especial de Informática sob nº 066060 - categoria A. Pelotas, RS: Universidade Federal de Pelotas.