OCORRÊNCIA DE MANCHA FOLIAR CAUSADA POR Pseudomonas syringae EM MALVA-CHEIROSA (Geranium borertorum L.).

NUNES, Cley Donizeti Martins 1, SILVA, Luzia Pereira 1 & MOURA, Andréa Bittencourt2.

1Aluno(a) do Curso de Doutorado em Fitossanidade, Universidade Federal de Pelotas, Campus Universitário, s/n°. C.P. 354, RS; 2Professora do Departamento de Fitossanidade, Faem/UFPel, Campus Universitário, s/n°. C.P. 354, Pelotas, RS, CEP96010-900. (UFPel, Pelotas, RS). cley@cpact.embrapa.br; lufia@unb.br; abmoura@ufpel.tche.br.

1. INTRODUÇÃO

Algumas espécies de plantas do gênero Geranium são originárias de regiões de clima temperado, encontradas nos países da América do Sul como Argentina, Brasil e Uruguai, e tornaram-se plantas invasoras na região sul do Rio Grande do Sul [10]. Na Coréia, essas plantas também são tidas como problema na cultura de colza (Brassica napus L.) [3].  
A literatura cita que as espécies da família Geraniaceae podem ser atacadas por diversos microorganismos. Geranium sp. por fungos: Alternaria alternata [16], Botrytis sp., Pythium sp. [12], Puccinia pelargonii-zonalis [5]; Pelargonium graveolens L. por nematóide Meloidogyne hapla (Chitwood) [2]; Geranium sp por vírus Cytorhabdoviruses [15], Pelargonium zonale e P. hortorum por bactéria Ralstonia solanacearum biovar 2/raça 3 [1] [17]; em cultivares de Geranium sp. por Xanthomonas campestris pv. pelargonii [4, 6, 7] e Pelargonium sp. por Pseudomonas syringae [14]. 
Recentemente observou-se nas folhas superiores da espécie Geranium borertorum L., popularmente conhecida como malva cheirosa, sintomas caracterizados por lesões necróticas circulares, de cor castanha-clara, bordo irregular e, geralmente, envolvidas por um halo amarelo (manchas aureoladas) (Figura 1A). 
A malva cheirosa é uma planta utilizada tanto como ornamental quanto para produção de óleos essenciais [15, 17]. Quando comercializada como planta ornamental, as manchas foliares depreciam seu valor de mercado. O conhecimento do agente causal é primordial para que se adotem medidas de controle eficazes que permitam ter maior produção comercial.  
Neste sentido, este trabalho teve como objetivo identificar o agente causal das manchas foliares da espécie de G. borertorum L.

2. MATERIAL E METODOS

Material vegetal: foram coletadas folhas de malva cheirosa que apresentavam lesões foliares necróticas com halo amarelo, na floricultura Samambaia, localizada no Município de Capão do Leão, RS.  Posteriormente foram feitos exames laboratoriais, por observações ao microscópio óptico, nos fragmentos de tecidos para verificar ocorrência ou não de exsudação de bactérias associada a essas lesões.
Isolamento do patógeno: tecidos foliares (aproximadamente 3 x 4 mm) apresentando sintomas de bactéria foram desinfetados, macerados em água destilada e esterilizada e a suspensão plaqueada em meio sólido 523 (Kado e Heskett, 1970) pelo método estriado, após incubado em condições ambientais, por 72 horas. Observações foram feitas e as colônias predominantes foram selecionadas e repicadas para tubos com meio de cultura.
Patogenicidade: A inoculação foi realizada em folhas destacadas, pela inserção de palitos estéreis no limbo foliar e no pecíolo da folha, onde foram depositados 10μL de suspensão bacteriana com concentração aproximadamente de 108 UFC/mL. As folhas, assim inoculadas, foram mantidas em câmara úmida com temperatura de 28°C até o surgimento dos sintomas. As plantas inoculadas que reproduziram sintomas foram avaliadas quanto à exudação, e o patógeno bacteriano reisolado.
Caracterização dos isolados: Os isolados patogênicos foram caracterizados através de testes bioquímicos, tintoriais culturais e fisiológicos descritos para determinação de gênero (coloração de Gram, relação com oxigênio, utilização de asparagina como única fonte de carbono e nitrogênio, produção de xantomonadina, indução de tumores, presença de catalase) e de espécies (produção de levan, oxidase, podridão mole em batata, produção de desidrolase arginínica e indução de reação de hipersensibilidade em folha de fumo (LOPAT), produção de pigmentos, temperatura limite de crescimento, hidrólise de gelatina, redução de nitrato, acúmulo de grânulos de PβHB, utilização de arabinose, celobiose, manitol, raminose, sacarose, e sorbitol), conduzidos conforme Schaad et al. (2001) e Mariano (2000).

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Nos isolamentos em placas com 72 horas de incubação, houve predominância de colônias brilhantes, circulares, de cor branca, bordos lisos, mucóides e elevadas.
A inoculação, tanto em folhas como em pecíolo, mostraram tratar-se de isolados patogênicos (Figura 1B). Os tecidos inoculados que mostraram sintomas apresentavam esxudação bacteriana, sendo obtidos culturas reisoladas destes, completando-se, assim, os postulados de Koch. Das colônias avaliadas, sete se mostraram-se patogênicas e foram identificadas ao nível de gênero e, posteriormente, de espécie.

B

A

Figura 1. - Sintomas de Pseudomonas syringae na folha de malva cheirosa observado no campo (A) e com inoculação artificial (B).

Segundo os testes, trata-se de bactéria: Gram negativa, aeróbica estrita, produtora de catalase e de pigmento fluorescente sob luz UV, que não produz xantomonadina e não induz tumores, mas utiliza asparagina como única fonte de carbono e nitrogênio (Tabela 1). Estes resultados permitem reconhecer esta bactéria como pertencente ao gênero Pseudomonas [9; 18].
Os testes de LOPAT (produção de levana, preseça de oxidase, atividade pectolítica, hidrólise de argenina e hipersensibilidade (HR) em tabaco), recomendados para a determinação de espécies de Pseudomonas fluorescentes, resultaram em +---+ (Tabela 1) o que permite enquadrar esta bactéria como Pseudomonas syringae [11]. Características adicionais foram determinadas (Tabela 1) para a confirmação da identificação [13; 18].
O gênero Pseudomonas engloba grande número de espécies, tanto saprófitas como patogênicas às plantas. Normalmente as bactérias pertencentes a este grupo são aeróbicas restritas, não esporogênicas e apresentam catalase positiva. Pesquisadores relatam que a bactéria Pseudomonas syringae é o agente causal de doenças de diversas culturas que incluem soja (Glycine max), feijão (Phaseolus vulgaris), fumo (Nicotiana tabacum ), café (Coffea arabica) e outras [8]. 

4. CONCLUSÕES

Este é o primeiro relato de ocorrência de P. syringae em malva cheirosa, no Brasil, conhecendo-se, assim uma nova doença para esta planta ornamental. A real importância da enfermidade e os danos na produção e na qualidade das flores e folhas ainda deverão ser avaliados ao longo do tempo. 

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] - ALMEIDA, I.M.G.; DESTEFANO, S.A.L.; RODRIGUES NETO, J.; MALAVOLTA JUNIOR, V.A. Murcha bacteriana do geranio causada por Ralstonia salanacearum biovar 2/raça 3 no Brasil. Revista de Agricultura, Piracicaba, v. 78, n. 1, p.49-56, 2003.
[2] - ANITHA, B. Nematodes associated with scented geranium, Pelargonium graveolens L. in Nilgiris and pathogenicity of Meloidogyne hapla (Chitwood).  Pest Management in Horticultural Ecossystems, v.3,n.2, mp. 117-119, 1997.
[3] - AHN, G. S.; KWON, B. S.; KIM, S. G.; CHUNG, D. H.  Chemical control of weed for rapes (Brassica napus) L. Journal of the Korean Society of Grassland Science, Sunchon, v. 15, n.3, p.186-191, 1995. 
[4] - BELLO, G. dal; CARRANZA, M.  First report of bacterial bight of geranium caused by Xanthomonas campestris pv. pelargonii in Argentina. Plant Disease, v. 80, n. 1, p. 103, 1996. 
[5] - CHASE, A.R. Geranium rust in the new century. Growr Talks, v.63, n. 4, p.150, 1999.
[6] - CHITTARANJAN, S. BOER, S.H. de.  Detection of Xanthomonas campestris pv. pelargonii in geranium and greenhouse nutrient solution by serological and PCR techniques.  European Journal of Plant Pathology, v.103, n. 6, p.555-563, 1997. 
[7] - DEMSAR, T.; DREO, T.; RAVNIKAR, M.   Bacterial blight of Geranium Xanthomonas campestris pv. pelargonii (Brown, 1923) Dye1978.  Zbornik predavanj in referatov 5 Slovensko Posvetovanje o Varstvu Rastlin, Catez ob Savi, Slovenija, p. 464-467, 2001. 
[8] - FERREIRA L. P.; SALGADO, C. L. Bactérias In: FILHO, A. B.; KIMATI, H.; AMORIM, L. M. Manual de Fitopatologia.  3. ed., São Paulo: Agronômica Ceres, 1995, v. 1, p. 97-131.
[9] – KRIEG, N. R. and HOLTZ, G. 1984. Bergey's manual of systematic bacteriology. Baltimore, USA. Williams and Wilkins. v. 1. 963 p. 
[10] - KISSMANN, K.G.; GROTH, D.  Plantas infestantes e nocivas.  BASF, São Paulo, Tomo III, 1995, 683p.
[11] – LELLIOT, R. A.; STEAD, D. E. Methods of diagnosis of bacterial diseases of plants. Oxford:Blackwell. Scientific, 1987, 216p.
[12] - HAUSBECK, M.  Managing geranium diseases.  Grower Talks, v. 59, n. 13, p.72-76, 1996. 
[13] - MARIANO, R. L. R. Manual de práticas em fitobacteriologia. Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2000. 171p.
[14] - MOORMAN, G. W. Commun Names of Plant Disease - Diseases of Geranium (Perlagonium). APS Net. Disponível em: < http://www.apsnet.org/online/common/names/geranium.asp > Última atualização 10/01/1998. Acesso em: 12.12.2004.
[15] - NOGUEIRA, N.L.; RODRIGUES, J.C.; ROSSI, M.L. Partículas semelhantes a rhabdovirus em três espécies ornamentais apresentando lesões locais e presença do acaro Brevipalpus. Summa Phytopathologica, v.29, n.3, p.278-282, 2003. 
[16] - PALMUCCI, H.E.; MACANFRONI, C.D. Presencia de Alternaria alternata en cultivos de geranio en Argentina. Fitoplatlogia, Lima, Peru, v. 36, n. 1, 19-23, 2001. 
[17] - PRADHANANANG, P.M.; MOMOL, M.T.; DANKERS, H.; MOMOL, E.A.: JONES, J.B.  First report of southern wilt caused by Ralstonia salanacearum on geranium in Florida.  Plant Health Progress, St. Paul, n.1-2, 2002. 
[18] - SHAAD, N. W.; JONES, J.B.; CHUN, W.  Laboratory guide for identification of plant pathogenic bacteria, 3ª ed., St. Paul, 2001, 373p.

Tabela 1 – Comparação das características do isolado bacteriano retirado da folha de malva cheirosa com a espécie de Pseudomonas syringae, adaptado de Schaad et al. (2001), MARIANO (2000), Lelliot & Stead (1987) e Krieg & Holtz (1984).
Características	Bactéria teste	P. syringae	
Coloração de Gram	-	-	
Preseça de catalase	+	+	
Pigmento fluorescente difusível	+	+	
Pigmento fluorescente não difusível	-	-	
Utilização de asparagina	+	+	
Anaerobiose facultativa	-	-	
Produção de xantomonadina	-	-	
Indução de tumores	-	-	
Levana	+	+	
Oxidase	-	-	
Atividade pectolitica	-.	-	
Hidrolise de arginina	-	-	
HR em tabaco	+	+	
Crescimento em 37°C	+	-	
Crescimento em 40°C	-	*	
Redução de nitrato	+	-	
PβHB	*	-	
Hidrólise de gelatina	+	V	
Utilização de: manitol	+	V	
                      celobiose	-	-	
                      sorbitol	-	+	
                      sacrose	+	+	
                      arabinose	-	-	
                      ramanose	+	-	
- negativo,  + positivo, V variável. * não realizado.